靜止的CD4+ T細(xì)胞幾乎不適應(yīng)遺傳操作，因為現(xiàn)有的方法通常假設(shè)細(xì)胞分裂，Keppler解釋說。“靜止的細(xì)胞根據(jù)定義是不會分裂的。”作為開發(fā)新方法的第一步，科學(xué)家團(tuán)隊優(yōu)化了栽培條件。因此，研究人員在從健康捐贈者的血液中提取這些細(xì)胞后，能夠在實驗室中保持它們的存活，不僅是像以前那樣的3-4天，而是長達(dá)6周。這一決定性的進(jìn)展伴隨著核作用的進(jìn)步。核作用是一種特殊的方法，可以將試劑送入細(xì)胞的細(xì)胞核。利用這項技術(shù)，研究人員將基因剪刀CRISPR-Cas引入到靜止的CD4+ T細(xì)胞中，使它們能夠?qū)λ拗骷?xì)胞的基因組進(jìn)行有針對性的修改——例如，通過所謂的敲除方法來消除基因。“這種組合非常有效，我們能夠觸及并操縱大約98%的細(xì)胞。而且，我們沒有激活CD4+ T細(xì)胞。”Keppler說。“特別令人興奮的是，我們能夠通過一次核作用同時高效地消除多達(dá)6個基因。在此之前，沒有人能在原代細(xì)胞中做到這一點——我們用從完整器官中分離出來的細(xì)胞做到了這一點。”

在未來，研究人員將能夠消除單個基因和整個信號通路，并分析它們的功能。通過敲除相應(yīng)的基因，他們已經(jīng)設(shè)法弄清楚了4個以前備受爭議的細(xì)胞因子是否在HIV感染中起作用。

在此基礎(chǔ)上，他們尋求第二種“敲入”方法，即插入額外的或稍作修改的基因，例如綠色熒光蛋白(GFP)基因。在這種蛋白質(zhì)的幫助下，研究人員可以分析目標(biāo)基因在特定條件下的活性變化，或者標(biāo)記特定的蛋白質(zhì)。“所有這些都讓我們第一次有機會研究在生理條件下HIV與人類靜止的CD4+ T細(xì)胞之間的相互作用，”該研究的共同第一作者Adrian Ruhle解釋道。“但我們也可以更好地研究這些細(xì)胞作為免疫細(xì)胞的一般作用，而不僅僅是艾滋病毒。”從長遠(yuǎn)來看，這組科學(xué)家希望對這些細(xì)胞的生物學(xué)有更好的了解，從而找到從患者體內(nèi)徹底消除艾滋病毒的新方法，因為全世界仍有約3700萬人感染了這種病毒。

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